人胰岛素（Insulin）说明书
人胰岛素（Insulin）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T 0.5mU/L – 16mU/L
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胰岛素（Insulin）含量。
实验原理 :本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛素（Insulin）水平。用纯化的人胰岛素（Insulin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素（Insulin），再与 HRP 标记的胰岛素（Insulin）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素（Insulin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胰岛素（Insulin）浓度。
试剂盒组成:
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（32mU/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求:
1.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤:
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16mU/L 5 号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
8.0mU/L 4 号标准品 150μl的5 号标准品加入150μl标准品稀释液
4.0mU/L 3 号标准品 150μl的4 号标准品加入150μl标准品稀释液
2.0mU/L 2 号标准品 150μl的3 号标准品加入150μl标准品稀释液
1.0mU/L 1 号标准品 150μl的2 号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、
待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50μl， 待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算:以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的OD值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存：2-8℃。
2.有效期：6个月
