肝星状细胞提取实验指南
点击次数：1303 更新时间：2013-07-30
肝星状细胞提取实验指南
星状细胞位于Disse间隙内,具有贮藏、代谢itA、合成细胞外基质（ECM）的功能;肝星状细胞的激活是肝纤维化形成的中心环节。
建立了经济、稳定的大鼠肝星状细胞提取和培养方法;传代培养可获得较为稳定的细胞系。肝星状细胞提取实验步骤如下：
1、大鼠门静脉置管，D-Hanks+肝素液灌注，*驱走肝内血液，至灰黄色。
2、0.5g/L的胶原酶（Hanks）离体灌注，5ml/min, 5min。
3、0.25g/L的胶原酶（Hanks）+消0.05g/L的DNA-1酶（Hanks）消化，10min。
4、中止消化后200目过滤，重悬。
5、50g离心去沉淀、取上清。
6、上清500g离心取沉淀。
7、0.05g/L的DNA-1酶（Hanks）重悬，500g再次梯度离心，取沉淀。
8、15%Optipepe重悬为10ml，上加10%Optipepe 10ml，上覆hanks液5ml（加时注意不要让界面混匀）
9、1400g离心17min，取白色细胞带。
10、爬片，固定，鉴定。
来源：《改良的大鼠肝星状细胞分离方法》拜力生物编辑整理
