细胞培养对替代胎牛血清的适应
点击次数：2414 更新时间：2012-02-10
细胞培养对替代胎牛血清的适应
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许多细胞zui易于采用连续适用法。将含有FBS的通用培养基和含有替代胎牛血清的培养基按1：1(体积比)混合，用混合后的培养基来培养细胞。每次成功传代后，按下列比例减少通用培养基的用量：
1：2、1：4、1：16、和99%含替代胎牛血清培养基。
对于每次胎牛血清的成分变化，都要将细胞传代培养2-3次以进行适应，细胞可能可以适应直接从FBS到替代胎牛血清的转换。起初要使用和FBS浓度相同的替代胎牛血清。细胞生长可能会发生延迟。可以传代2-3次，使细胞生长速率恢复到以前的水平。
细胞从单层生长到悬浮培养适应 贴壁细胞对悬浮培养的适应可能需要提高细胞密度或使用无胎牛血清
培养基培养的细胞。本方案说明了使用T-25或T-75培养瓶培养的细胞适应时所需要的步骤。大约需要6-8个T-75培养瓶才可以提供一个转瓶或摇瓶所需的Hela细胞量(5X107)。
注意：对于不同的细胞系，zui初培养瓶的细胞数量各不相同。为了得到*结果，请遵从下列事项：
使用50-80%汇合的细胞；
使用存活率大于90%的细胞。
1．去除生长培养基。
2．用不含钙镁的1XD-PBS冲洗细胞(T-25培养瓶中加3ml,T-75培养瓶中加5ml)。丢弃冲洗用的溶液。
3．将-EDTA(0.05%，0.53mMEDTA?4Na;T-25培养瓶
中加3ml，T-75培养瓶中加5ml)加到培养瓶中与细胞相对的一
侧。摇动培养瓶几次。丢弃所有溶液，只保留能够形成一薄层液
膜覆盖住细胞的-EDTA即可。在37℃下孵育细胞5-10分
钟。孵育期间用显微镜观测细胞。当细胞都变圆后，轻敲培养瓶
以使细胞离开瓶壁。
4．加入生长培养基(T-25培养瓶中加6ml,T-75培养瓶中加10ml) 使细胞悬浮。
注意：如果使用无胎牛血清培养基，应加入大豆抑制剂。通常使0.25mg/ml的抑制剂，按1：1(体积比)的比例加入即可抑制。
5．将细胞悬液转移到一个15ml离心管中。用100Xg的速度离心4分钟。吸去上清液(-EDTA与生长培养基的混合物)。
6．用5ml生长培养基重悬细胞。用100Xg的速度离心4分钟。
