血清的培养与分类
点击次数：1791 更新时间：2012-02-10
血清的培养与分类
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血清，以牛血清同马血清为zui常用。血清内含有多种促细胞生长因子，促贴壁因子及其它活性物质等。一般需加10%-20%。
附着底物：
1、玻璃
2、一次性聚氯乙烯材料
3、饲细胞(Feeder cell)用成纤维细胞或其他细胞长成单层后，再用大剂量射线照射，使细胞失去增殖能力但尚存活同有代谢功能。将特别难培养地细胞接种于其上。
体外培养细胞成功率分析
成功地关键:培养物必须贴附在底物上
细胞生长同增殖
1、培养条件
2、组织同细胞地供体年龄
3、贴附底物
4、培养方法：酶消化分离
组织培养设施同基本条件
实验室设计：细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境同条件必须保证无微生物污染同不受其它有害因素地影响。细胞培养室同设计原则是防止微生物污染同有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥同无烟尘。细胞培养室地设计原则一般是无菌。操作区设在室内较少走动地内侧，常规操作同封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。常用设施及设备
1、超净工作台；
2、洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。
3、无菌操作间：一般由更衣间、缓冲间同操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好地无菌物品等。
4、分析间：显微镜、计算机及打印机等。
5、操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物
培养器皿
常用地器皿有下面几种。
1、液体储存瓶：用于储存各种配制好地培养液、血清等液体，常用规格有500ml、250ml、100ml。
2、培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶地形态各异，规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等几种
3、培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm
4、培养板
培养用液：(Balanced Salt Solution,BSS)、天然培养基(Natural Medium)、合成培养基(Synthetic Medium)Hanks’、 (Hanks’ Balanced Salt Solutions，HBSS)
成分 含量(g/L)
CaCl2 (无水氯化钙) 0.14
KCl 0.40
KH2PO4 0.06
MgCl2?6H2O 0.10
MgSO4?7H2O 0.10
NaCl 8.00
NaCO3 0.35
Na2HPO4 0.048
D-Glucose 1.00
Phenol Red 0.01
钙镁有促使细胞凝结作用,配制离散细胞用地消化液同细胞洗涤液时,宜采用D-Hanks
天然培养基
血清 细胞培养液中添加地血清有牛血清、马血清、人血清等，其中牛血清是zui常用地血清，分为胎牛血清同新生小牛血清
热灭活是指56℃, 30 分钟加热已*解冻地血清。加暖过程中须规则摇晃均匀。此热处理地目地是使血清中地补体成分(complement)灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清地质量 。
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